Mètode colorimètric: una anàlisi basada en una comparació de la saturació del color de les substàncies investigades i conegudes. Els resultats de les proves físiques i químiques són de gran valor per a moltes branques de la ciència, però sobretot la recerca s'utilitza en medicina.
L'essència del mètode colorimètric
Hi ha molts tipus de proves que determinen la composició química de les substàncies. Alguns d'ells són universals i s'utilitzen àmpliament en diversos camps, d' altres són específics, amb major precisió. El mètode colorimètric és universal.
L'essència de l'anàlisi rau en el fet que la saturació del color d'una solució amb una concentració desconeguda es compara amb el color d'una solució estàndard. Durant l'anàlisi, com a resultat de la interacció del component investigat amb un determinat reactiu, es forma un compost de color. Un cop finalitzada la reacció, el color resultant es compara amb el color de les solucions, la concentració de les quals ja es coneix.
Es creu que el fundador de la colorimetria és Robert Boyle. Va fer servir la pressiótanins per distingir el ferro del coure en solució. Va ser Boyle qui va notar que com més gran era la concentració de ferro a la solució, més ric era el to d'aquesta última.
Colorimetria
La colorimetria és un mètode per determinar la quantitat d'una substància en solucions. L'anàlisi es basa en la llei de Bouguer-Lambert-Beer: quan un feix de llum colpeja una capa densa absorbent d'una substància, la seva intensitat es debilita.
El mètode colorimètric per determinar la concentració d'una substància pot utilitzar una comparació visual o comparació utilitzant instruments especials per mesurar la intensitat del color. La comparació es fa de manera directa i compensatòria.
- Recte. El mètode consisteix a comparar el nivell de color de la solució de prova a una determinada densitat i temperatura del líquid amb una solució de referència. Quan s'utilitzen fotocolorímetres i espectrofotòmetres, s'utilitza aigua destil·lada com a solució de referència. Els dispositius mesuren la intensitat del corrent, que depèn de la intensitat de la llum.
- Compensatori. El mètode es basa en portar el color de la mostra estudiada a la de referència. El resultat s'aconsegueix afegint un dissolvent o augmentant l'alçada de la capa del medi tenyit.
L'ús d'un espectrofotòmetre, monocromador i altres instruments de precisió simplifica encara més el mètode d'investigació ja senzill i permet augmentar la precisió dels resultats. Aquests dispositius són capaços de mesurar la quantitat de transmissió de llum i determinar la longitud d'ona.
On s'aplica l'anàlisi
El mètode d'anàlisi colorimètric s'utilitza quan es coneix la composició química exacta, hi ha una mostra de referència per a la comparació i la temperatura de la prova i la mostra de referència és la mateixa. Si necessiteu determinar ràpidament la quantitat d'una substància de color, però és tan petita que és impossible aplicar el mètode analític.
La colorimetria s'utilitza àmpliament en medicina per a la investigació bioquímica clínica i altres àrees:
- indústria farmacèutica;
- indústria d'alimentació i alcohol;
- agronomia (determinació de la qualitat del sòl).
Pros i contres
El mètode colorimètric, com qualsevol altre, té pros i contres.
Els avantatges inclouen els següents:
- facilitat d'anàlisi, procediments preparatoris mínims;
- possibilitat de provar fins i tot amb una petita quantitat de material de prova;
- no calen equips cars, tot i que darrerament s'utilitzen cada cop més dispositius moderns que no són barats. Però proporcionen el resultat més precís.
Inconvenients: poca precisió de l'anàlisi en comparació amb els mètodes analítics.
Mètode biuret per a la determinació de proteïnes
La proteïna del sèrum sanguini és un indicador que reflecteix l'estat d'homeòstasi. Un augment de la concentració d'un compost macromolecular a la sang s'anomena hiperproteinèmia, un baix contingut s'anomena hipoproteinèmia.
Proteïnesel sèrum sanguini té una composició, estructura, propietats diferents, realitza diferents funcions. Es divideixen en enzims, hormones, immunoglobulines i altres. Tots els grups de proteïnes tenen una sèrie de característiques comunes, a partir de les quals s'han desenvolupat mètodes per a la determinació de compostos orgànics macromoleculars en fluids biològics.
De tots els mètodes de la bioquímica clínica, els mètodes colorimètrics per determinar proteïnes s'utilitzen amb més freqüència. Són relativament barats, cosa que és important per a les organitzacions pressupostàries. i són bastant senzills. El més comú és el mètode del biuret. L'essència del mètode: les proteïnes en un ambient alcalí reaccionen amb sulfat de coure i formen compostos morats. El contingut de proteïnes a la sang està determinat per la saturació de la tinció. El biomaterial per analitzar es pren al matí amb l'estómac buit.
L'anàlisi és molt precisa, però hi ha factors que afecten la concentració de proteïnes a la sang:
- activitat física poc abans del mostreig de biomaterial;
- últimes setmanes d'embaràs i lactància;
- l'ús dels fàrmacs Corticotropin, Miscleron, Clofibrate augmenta el contingut de proteïnes a la sang i l'ús de Pyrazinamide i estrògens - per reduir la concentració;
- posició de la mà equivocada durant el mostreig de biomaterial.
Determinació del ferro
La quantitat de ferro a la sang és un dels principals indicadors en el diagnòstic de diverses mal alties. La substància es concentra en l'hemoglobina, que assegura el transport d'oxigen als teixits. Perdeterminació del ferro pel mètode colorimètric, la majoria de les vegades, s'utilitza una solució de batofenantrolina (0,02%) com a reactiu principal. Biomaterial: sèrum sense rastres d'hemòlisi.
L'essència del mètode: la interacció d'ions ferrosos i batofenantrolina sulfatada forma un complex de colors, la saturació del qual es determina fotomètricament. Per obtenir una solució clara, cal seguir les regles de mostreig del biomaterial, però per determinar amb precisió les densitats òptiques dels complexos ferro-lligant, el ferro s'allibera de l'hemoglobina mitjançant hidroxilamina i detergents (dodecil sulfat de sodi). El resultat de la prova determina la presència i el grau de patologia. La concentració normal de ferro hauria de ser:
- 14, 2 – 26,0 µmol/L (homes);
- 10, 6-21, 7 µmol/L (dones).
La deficiència de ferro s'acostuma a associar amb la pèrdua de sang, una ingesta dietètica inadequada o una mala absorció del tracte gastrointestinal.
Prova de colesterol
El colesterol és una substància orgànica que es troba a la paret cel·lular de molts organismes, inclosos els humans. És necessari per a la producció de colecalciferol i hormones esteroides. Es considera normal un nivell de colesterol de 3,37-5,2 mmol/L. El contingut elevat és una de les principals causes de l'aterosclerosi.
Els mètodes colorimètrics per determinar el colesterol us permeten reconèixer les mal alties vasculars en una fase inicial. Segons els resultats patoanatòmics en el resultat letal de la isquèmia, la concentració d'alcohol lipòfil en pacientsera de 6,5-7,8 mmol/L.
El principi del mètode colorimètric és que el colesterol s'oxida per la 3beta-hidroxi-esteroide oxidoreductasa, alliberant peròxid d'hidrogen, que converteix la p-aminoatipirina en un compost de color. El contingut de colesterol ve determinat per la saturació del seu color.
Quan es realitza una prova en un nen, s'ha de tenir en compte que la concentració de colesterol en la infància no ha de superar els 4,1 mmol/l.
Què és el mètode colorimètric enzimàtic?
Les proves enzimàtiques es basen en l'ús de reaccions per part d'enzims d' alta activitat. S'utilitzen àmpliament en química analítica per determinar diverses substàncies, des d'ions nitrat fins a macromolècules.
Els mètodes enzimàtics (enzimàtics) són específics, permetent l'anàlisi de determinades substàncies en presència d' altres substàncies similars en composició. Els mètodes més comuns basats en l'ús de l'enzim - glucosa oxidasa. La prova s'utilitza per determinar la concentració de glucosa a la sang. La precisió de la prova permet utilitzar-la per ajustar la dosi d'agents hipoglucèmics en pacients amb diabetis tipus 2.
El mètode de l'oxidant de la glucosa es considera un dels millors mètodes quantitatius per determinar la glucosa. Tant la sang (capil·lar) com el sèrum es poden utilitzar com a biomaterial, però el plasma és més preferible perquè té un contingut d'hematocrit més baix, la qual cosa afecta negativament la precisió del resultat.
El mètode cinètic de fotometria s'utilitza principalment. La seva essència rau en el fet quela proporció establerta de glucosa oxidasa i peroxidasa, durant un cert període de temps després de l'inici de la reacció, la velocitat de formació d'un compost de color serà proporcional al nivell de glucosa de la mostra. El principal avantatge de la prova és que el resultat no es veu afectat per la presència de compostos de tercers a la mostra. El mètode també té un inconvenient: per a la prova es necessiten instruments de mesura cars de fabricants alemanys o suecs.
Conclusió
El mètode colorimètric és precís i fàcil d'utilitzar. El seu ús en medicina permet la detecció precoç de diversos canvis patològics en el cos. Amb la introducció de noves tecnologies, el mètode s'està millorant i és cada cop més popular.
