L'estudi dels bacteris és de gran importància pràctica per als humans. Fins ara, s'han descobert un gran nombre de procariotes, que es diferencien entre si en patogenicitat, àrea de distribució, forma, mida, nombre de flagels i altres paràmetres. Per estudiar aquesta soca en detall, s'utilitza un mètode d'investigació bacteriològica.
Quins són els mètodes per analitzar les cèl·lules bacterianes?
Per determinar si els bacteris són patògens, el cultiu s'examina de diverses maneres. Entre ells:
1. Mètode bacterioscòpic.
2. Mètode bacteriològic.
3. Mètode biològic.
Els mètodes d'investigació bacterioscòpica i bacteriològica es basen directament en el treball amb cèl·lules procariotes, quan es requereix una anàlisi biològica per estudiar l'efecte d'aquestes cèl·lules en l'organisme viu dels animals d'experimentació. Segons el grau de manifestació de certs signes de la mal altia, el científic pot ferconclusió sobre la presència o absència de bacteris patògens a la mostra, així com propagar-los de manera natural al cos de l'animal per obtenir el seu cultiu i ús en altres treballs.
El mètode bacteriològic d'investigació és diferent del bacterioscòpic. En el primer, s'utilitza un cultiu de procariotes vius especialment preparat per a l'anàlisi, mentre que en el segon es treballa amb cèl·lules vives o mortes en un portaobjectes de vidre.
Fases del mètode d'investigació bacteriològica. Microbiologia
El principi d'estudi de les propietats d'un cultiu bacterià pot ser útil tant per als microbiòlegs que s'han marcat l'objectiu d'estudiar cèl·lules procariotes, com per als tècnics de laboratori que tenen com a missió establir la patogenicitat o no patogenicitat dels bacteris, i després diagnostiqueu el pacient.
El mètode d'estudi dels bacteris es divideix en tres etapes:
1. Aïllament de bacteris de la mostra original.
2. Sembrant bacteris i cultivant un cultiu pur, estudiant les seves propietats.
3. Estudi detallat de cèl·lules bacterianes.
Primera etapa
La mostra, o frotis, es pren de la superfície lliure del medi o del pacient. Així, obtenim un “cóctel” de molts tipus de bacteris que cal sembrar en un medi nutritiu. De vegades és possible aïllar immediatament els bacteris necessaris, coneixent els seus focus de distribució al cos.
Després de dos o tres dies, es seleccionen les colònies desitjades ies sembren en medis sòlids de plaques de Petri amb l'ajuda d'un bucle estèril. Molts laboratoris treballen amb tubs d'assaig, que poden contenir medis nutritius sòlids o líquids. Així es porta a terme el mètode bacteriològic d'investigació en microbiologia.
Segona etapa
Després d'obtenir colònies individuals de bacteris, es realitza una macro i microanàlisi directa. Es mesuren tots els paràmetres de les colònies, es determina el color i la forma de cadascuna d'elles. No és estrany comptar colònies en una placa de Petri i després en el material de partida. Això és important en l'anàlisi de bacteris patògens, el nombre dels quals depèn del grau de la mal altia.
El mètode d'investigació bacteriològic, la segona etapa del qual és l'estudi de colònies individuals de microorganismes, es pot associar amb un mètode biològic per analitzar bacteris. Un altre objectiu de treballar en aquesta etapa és augmentar la quantitat de material d'origen. Això es pot fer en un medi nutritiu, o podeu realitzar un experiment in vivo amb organismes experimentals vius. Els bacteris patògens es multiplicaran i, com a resultat, la sang contindrà milions de cèl·lules procariotes. És fàcil preparar el material de treball necessari de bacteris a partir de la sang presa.
Tercera etapa
La part més important de l'estudi és la determinació de les propietats morfològiques, bioquímiques, toxigèniques i antigèniques del cultiu bacterian. Es treballa amb cultius prèviament netejats en un medi nutritiu, així com amb preparats (sovint tenyits) al microscopi.
Estableix la propietatbacteris patògens o oportunistes a un o altre grup sistemàtic, així com per determinar la seva resistència als fàrmacs, permet el mètode bacteriològic d'investigació. Etapa 3: antibiòtics, és a dir, anàlisi del comportament de les cèl·lules bacterianes en les condicions del contingut dels fàrmacs en el medi.
L'estudi de la resistència als antibiòtics d'un cultiu té una gran importància pràctica quan cal prescriure els fàrmacs necessaris i, sobretot, eficaços per a un pacient determinat. Aquí és on el mètode d'investigació bacteriològica pot ajudar.
Què és un mitjà de creixement?
Per al desenvolupament i la reproducció, els bacteris han d'estar en medis nutritius preparats prèviament. Per consistència, poden ser líquids o sòlids, i per origen vegetal o animal.
Requisits bàsics dels mitjans:
1. Esterilitat.
2. Màxima transparència.
3. Indicadors òptims d'acidesa, pressió osmòtica, activitat de l'aigua i altres valors biològics.
Obtenció de colònies aïllades
1. Mètode Drygalsky. Consisteix en el fet que s'aplica un frotis amb diversos tipus de microorganismes al bucle bacterià. Aquest bucle es fa passar per la primera placa de Petri amb un medi nutritiu. A més, sense canviar el bucle, el mètode de material residual es porta a terme a la segona i tercera plaques de Petri. Així, a les darreres mostres de la colònia, els bacteris no es sembraran massa densament, simplificant així la possibilitat de trobar els necessaris per al treball.bacteris.
2. Mètode Koch. Utilitza tubs d'assaig amb medi nutrient fos. S'hi col·loca un bucle o pipeta amb un frotis de bacteris, després del qual s'aboca el contingut del tub d'assaig en una placa especial. L'agar (o gelatina) es solidifica després d'un temps i és fàcil trobar les colònies cel·lulars desitjades en el seu gruix. És important diluir la barreja de bacteris en provetes abans de començar a treballar perquè la concentració de microorganismes no sigui massa alta.
El mètode bacteriològic d'investigació, les etapes del qual es basen en l'aïllament del cultiu de bacteris desitjat, no pot prescindir d'aquests dos mètodes per trobar colònies aïllades.
Antibiograma
Visualment, la reacció dels bacteris als fàrmacs es pot veure de dues maneres pràctiques:
1. Mètode de disc de paper.
2. Reproducció de bacteris i antibiòtics en un medi líquid.
El mètode del disc de paper requereix un cultiu de microorganismes que s'han cultivat en un medi nutritiu sòlid. En aquest mitjà poseu uns quants trossos de paper arrodonit sucats amb antibiòtics. Si el fàrmac fa front amb èxit a la neutralització de les cèl·lules bacterianes, després d'aquest tractament hi haurà una àrea sense colònies. Si la reacció a l'antibiòtic és negativa, el bacteri sobreviurà.
En el cas d'utilitzar un medi nutritiu líquid, primer preparar diverses provetes amb un cultiu de bacteris de diferents dilucions. A aquestes provetes s'afegeixen antibiòtics i durant el dia s'observa el procés d'interacció entre la substància i els microorganismes. Com a resultat, s'obté un antibiograma d' alta qualitat, segons el qual és possiblejutjar l'efectivitat del fàrmac per a un cultiu determinat.
Tasques principals d'anàlisi
Aquí s'enumeren els objectius i les etapes del mètode bacteriològic d'investigació.
1. Obtenir el material de partida que servirà per aïllar les colònies bacterianes. Pot ser un frotis de la superfície de qualsevol objecte, membrana mucosa o cavitat d'un òrgan humà, una anàlisi de sang.
2. Cultiu de cultiu en un medi nutritiu sòlid. Després de 24-48 hores, es poden trobar colònies de diferents tipus de bacteris a la placa de Petri. Seleccionem el desitjat segons criteris morfològics i/o bioquímics i fem un treball posterior amb ell.
3. Propagació de la cultura resultant. El mètode d'investigació bacteriològica es pot basar en un mètode mecànic o biològic per augmentar el nombre de cultius bacterians. En el primer cas, es treballa amb medis nutritius sòlids o líquids, sobre els quals els bacteris es multipliquen en un termòstat i formen noves colònies. El mètode biològic requereix condicions naturals per augmentar el nombre de bacteris, de manera que aquí l'animal d'experimentació s'infecta amb microorganismes. Al cap d'uns dies, es poden trobar molts procariotes en una mostra de sang o un frotis.
4. Treballant amb cultura purificada. Per determinar la posició sistemàtica dels bacteris, així com la seva pertinença als patògens, cal realitzar una anàlisi exhaustiva de les cèl·lules segons les característiques morfològiques i bioquímiques. Quan s'estudien grups patògens de microorganismes, és important saber-hoquina eficàcia són els antibiòtics.
Aquesta era una característica general del mètode d'investigació bacteriològica.
Característiques de l'anàlisi
La regla principal de la investigació bacteriològica és la màxima esterilitat. Si treballeu amb tubs d'assaig, els cultius i subcultius de bacteris només s'han de fer amb una làmpada d'esperit calenta.
Totes les etapes del mètode d'investigació bacteriològica requereixen l'ús d'un bucle especial o una pipeta Pasteur. Les dues eines s'han de tractar prèviament a la flama d'una làmpada d'alcohol. Pel que fa a la pipeta Pasteur, aquí, abans de l'esterilització tèrmica, cal trencar la punta de la pipeta amb unes pinces.
La tècnica de sembrar bacteris també té les seves característiques. En primer lloc, quan s'inocula en un medi sòlid, es passa un bucle bacterian per la superfície de l'agar. El bucle, és clar, ja hauria de tenir una mostra de microorganismes a la superfície. També es practica la inoculació al medi de cultiu, en aquest cas el bucle o la pipeta han d'arribar al fons de la placa de Petri.
Quan es treballa amb mitjans líquids, s'utilitzen tubs d'assaig. Aquí és important assegurar-se que els líquids no toquin les vores dels objectes de vidre o els taps de laboratori i que els instruments utilitzats (pipeta, bucle) no toquin objectes i superfícies estranyes.
La importància del mètode de recerca biològica
L'anàlisi de mostres de bacteris té les seves aplicacions pràctiques. Abans de resEl mètode d'investigació bacteriològica es pot utilitzar en medicina. Per exemple, cal estudiar la microflora del pacient per establir el diagnòstic correcte, així com per desenvolupar el curs correcte de tractament. Un antibiograma ajuda aquí, que mostrarà l'activitat dels fàrmacs contra el patogen.
L'anàlisi de bacteris s'utilitza al laboratori per detectar mal alties perilloses com la tuberculosi, la febre recurrent o la gonorrea. També s'utilitza per estudiar la composició bacteriana de les amígdales i les cavitats dels òrgans.
El mètode d'investigació bacteriològica es pot utilitzar per determinar la contaminació del medi ambient. Segons les dades sobre la composició quantitativa i qualitativa d'un frotis de la superfície d'un objecte, es determina el grau de població d'aquest entorn per microorganismes.
