El diagnòstic de laboratori de gairebé totes les mal alties infeccioses es basa en la detecció d'anticossos a la sang del pacient, que es produeixen contra els antígens del patogen, mitjançant els mètodes de reaccions serològiques. Van entrar a la pràctica mèdica des de finals del segle XIX fins a principis del segle XX.
El desenvolupament de la ciència ha ajudat a determinar l'estructura antigènica dels microbis i les fórmules químiques de les seves toxines. Això va permetre crear sèrums no només terapèutics, sinó també diagnòstics. S'obtenen mitjançant l'administració de patògens atenuats a animals de laboratori. Després de diversos dies d'exposició, la sang de conills o ratolins s'utilitza per preparar preparats utilitzats per identificar microbis o les seves toxines mitjançant proves serològiques.
La manifestació externa d'aquesta reacció depèn de les condicions de la seva configuració i de l'estat dels antígens a la sang del pacient. Si les partícules microbianes són insolubles, precipiten, lisen, s'uneixen o immobilitzen al sèrum. Si els antígens són solubles, apareix el fenomen de neutralització o precipitació.
Reacció d'aglutinació (RA)
La prova d'aglutinació serològica és molt específica. És fàcil de realitzar i bastantvisual, per determinar ràpidament la presència d'antígens al sèrum sanguini del pacient. S'utilitza per provar la reacció de Vidal (diagnòstic de febre tifoide i paratifoide) i Weigl (febre tifoidea).
Es basa en una interacció específica entre anticossos humans (o aglutinines) i cèl·lules microbianes (aglutenògens). Després de la seva interacció, es formen partícules que precipiten. Aquest és un signe positiu. Es poden utilitzar agents microbians vius o morts, fongs, protozous, cèl·lules sanguínies i cèl·lules somàtiques per configurar la reacció.
Químicament, la reacció es divideix en dos passos:
- Connexió específica d'anticossos (AT) amb antígens (AG).
- No específic: precipitació de conglomerats AG-AT, és a dir, formació d'aglutinats.
Reacció d'aglutinació indirecta (IPHA)
Aquesta reacció és més sensible que l'anterior. S'utilitza per diagnosticar mal alties causades per bacteris, paràsits intracel·lulars i protozous. És tan específic que fins i tot es poden detectar concentracions molt baixes d'anticossos.
Per a la seva producció s'utilitzen eritròcits d'ovella purificats i glòbuls vermells humans pretractats amb anticossos o antígens (segons el que vulgui trobar el tècnic de laboratori). En alguns casos, els glòbuls vermells humans es tracten amb immunoglobulines. Es considera que s'han produït reaccions serològiques dels eritròcits si s'han assentat al fons del tub. Sobre una reacció positivadiguem quan les cel·les estan disposades en forma de paraigua invertida, ocupant tot el fons. Es compta una reacció negativa si els eritròcits s'instal·len en una columna o en forma de botó al centre de la part inferior.
Reacció de precipitació (RP)
Les reaccions serològiques d'aquest tipus s'utilitzen per detectar partícules extremadament petites d'antígens. Aquests poden ser, per exemple, proteïnes (o parts d'aquestes), compostos de proteïnes amb lípids o hidrats de carboni, parts de bacteris, les seves toxines.
Els sèrums per a la reacció s'obtenen infectant artificialment animals, normalment conills. Amb aquest mètode, podeu obtenir absolutament qualsevol sèrum precipitant. El mecanisme d'acció de les reaccions de precipitació serològica és similar a les reaccions d'aglutinació. Els anticossos continguts en el sèrum es combinen amb antígens en una solució col·loïdal, formant grans molècules proteiques que es dipositen al fons del tub o al substrat (gel). Aquest mètode es considera molt específic i pot detectar fins i tot quantitats insignificants d'una substància.
S'utilitza per diagnosticar pesta, tularèmia, àntrax, meningitis i altres mal alties. A més, està involucrat en un examen mèdic forense.
Reacció de precipitació en gel
Les reaccions serològiques es poden dur a terme no només en un medi líquid, sinó també en gel d'agar. Això s'anomena mètode de precipitació difusa. Amb la seva ajuda, s'estudia la composició de mescles antigèniques complexes. Aquest mètode es basa en la quimiotaxi dels antígens als anticossos i viceversa. En un gel es mouenentre si a diferents velocitats i, reunint-se, formen línies de precipitació. Cada línia és un conjunt d'AG-AT.
Reacció de neutralització d'exotoxines amb antitoxina (PH)
Els sèrums antitòxics són capaços de neutralitzar l'acció de l'exotoxina produïda pels microorganismes. Aquestes reaccions serològiques es basen en això. La microbiologia utilitza aquest mètode per valorar sèrums, toxines i toxoides i determinar la seva activitat terapèutica. El poder de neutralització de toxines està determinat per les unitats convencionals - AE.
A més, gràcies a aquesta reacció, és possible determinar l'espècie o el tipus d'exotoxina. S'utilitza en el diagnòstic de tètanus, diftèria, botulisme. L'estudi es pot dur a terme tant "sobre vidre" com en gel.
Reacció de lisi (RL)
El sèrum immunitari, que entra a l'organisme del pacient, té, a més de la seva funció principal d'immunitat passiva, també propietats lisants. És capaç de dissoldre agents microbians, elements estranys cel·lulars i virus que entren al cos del pacient. En funció de l'especificitat dels anticossos inclosos en el sèrum, s'aïllen bacteriolisines, citolisis, espirochetolizins, hemolisines i altres.
Aquests anticossos específics s'anomenen "complement". Es troba en gairebé tots els fluids del cos humà, té una estructura proteica complexa i és extremadament sensible a l'augment de temperatura, sacsejades, àcids i llum solar directa. Però en estat sec és capaç de retenirles seves propietats lisants fins a sis mesos.
Hi ha aquest tipus de reaccions serològiques d'aquest tipus:
- bacteriòlisi;
- hemòlisi.
La bacteriòlisi es realitza mitjançant el sèrum sanguini del pacient i el sèrum immune específic amb microbis vius. Si hi ha prou complement a la sang, l'investigador veurà que el bacteri es lisa i la reacció es considerarà positiva.
La segona reacció serològica de la sang és que una suspensió de glòbuls vermells del pacient es tracta amb sèrum que conté hemolisines, que només s'activen en presència d'un cert compliment. Si n'hi ha, l'assistent de laboratori observa la dissolució dels glòbuls vermells. Aquesta reacció s'utilitza àmpliament en la medicina moderna per determinar el títol del complement (és a dir, la seva menor quantitat que provoca la lisi d'eritròcits) en el sèrum sanguini i per realitzar una anàlisi per a la fixació del complement. És d'aquesta manera que es realitza una prova serològica per a la sífilis: la reacció de Wasserman.
Reacció de fixació del complement (CFR)
Aquesta reacció s'utilitza per detectar anticossos contra un agent infecciós en el sèrum sanguini del pacient, així com per identificar el patogen per la seva estructura antigènica.
Fins a aquest punt, hem descrit reaccions serològiques senzilles. La RSK es considera una reacció complexa, ja que no hi interaccionen dos, sinó tres elements: anticossos, antigen i complement. La seva essència rau en el fet que la interacció entre l'anticossos i l'antigennomés es produeix en presència de proteïnes del complement, que s'adsorbeixen a la superfície del complex AG-AT format.
Els mateixos antígens, després de l'addició del complement, pateixen canvis significatius, que mostren la qualitat de la reacció. Pot ser lisi, hemòlisi, immobilització, acció bactericida o bacteriostàtica.
La reacció en si es produeix en dues fases:
- Formació d'un complex antigen-anticossos que no és visible visualment per a l'examinador.
- Canvi de l'antigen sota l'acció del complement. Aquesta fase la majoria de vegades es pot rastrejar a ull nu. Si la reacció no és visible visualment, s'utilitza un sistema indicador addicional per identificar els canvis.
Sistema d'indicadors
Aquesta reacció es basa en la fixació del complement. Els eritròcits de RAM purificats i el sèrum hemolític sense complement s'afegeixen al tub d'assaig una hora després d'establir el RSC. Si un complement no lligat roman al tub d'assaig, s'unirà al complex AG-AT format entre les cèl·lules de la sang d'ovella i l'hemolisina, i farà que es dissolguin. Això vol dir que RSK és negatiu. Si els eritròcits es van mantenir intactes, llavors, en conseqüència, la reacció és positiva.
Prova d'hemaglutinació (RGA)
Hi ha dues reaccions d'hemaglutinació fonamentalment diferents. Un d'ells és serològic, s'utilitza per determinar els grups sanguinis. En aquest cas, els glòbuls vermells interaccionen amb anticossos.
I el segonla reacció no s'aplica a serològics, ja que els glòbuls vermells reaccionen amb hemaglutinines produïdes pels virus. Com que cada patogen només actua sobre eritròcits específics (gallina, xai, mico), aquesta reacció es pot considerar molt específica.
Podeu saber si una reacció és positiva o negativa per la ubicació de les cèl·lules sanguínies a la part inferior del tub d'assaig. Si el seu patró s'assembla a un paraigua invertit, aleshores el virus desitjat està present a la sang del pacient. I si tots els eritròcits s'han format com una columna de moneda, no hi ha patògens desitjats.
Prova d'inhibició de l'hemaglutinació (HITA)
Aquesta és una reacció molt específica que permet determinar el tipus, tipus de virus o la presència d'anticossos específics al sèrum sanguini del pacient.
La seva essència rau en el fet que els anticossos afegits al tub d'assaig amb el material d'assaig impedeixen la deposició d'antígens sobre els eritròcits, aturant així l'hemaglutinació. Aquest és un signe qualitatiu de la presència a la sang d'antígens específics per al virus específic que es busca.
Reacció d'immunofluorescència (RIF)
La reacció es basa en la capacitat de detectar complexos AG-AT amb microscòpia fluorescent després del seu tractament amb colorants de fluorocrom. Aquest mètode és fàcil de manejar, no requereix aïllament de cultiu pur i requereix poc temps. És indispensable per al diagnòstic ràpid de mal alties infeccioses.
A la pràctica, aquestes reaccions serològiques es divideixen en dos tipus: directes i indirectes.
RIF directe es produeix a partir deantigen, que es tracta prèviament amb sèrum fluorescent. I la indirecta és que primer es tracta el fàrmac amb un diagnosticum convencional que conté antígens per als anticossos d'interès, i després es torna a aplicar el sèrum luminescent, específic per a les proteïnes del complex AG-AT, i les cèl·lules microbianes. es fan visibles sota microscòpia.
